Защита заквасок от бактериофага (часть 17)

12-04-2012, 01:37

При определении количества фагов в различных объектах на заводе нужно использовать в качестве тест-культур набор индикаторных штаммов, который вырабатывается на Угличской биофабрике, и можно использовать саму закваску, принимая во внимание, что негативные колонии на газоне, образуемом микрофлорой закваски, появляются только при наличии в составе этой микрофлоры не менее 20-40% чувствительных к данному фагу клеток, когда закваску уже нужно изымать из обращения. При определении наличия на заводе фагов к конкретным штаммам для решения вопроса о возможности использования того или иного штамма этот штамм и должен служить индикаторным.
Среды для выявления фагов должны быть хорошо забуферены, чтобы получить высокую плотность клеток индикаторных штаммов, необходимую для получения газона. При высокой плотности популяции титр фага может достигать 10в10. Нужно следить, чтобы буферные соли не связывали ионы Ca2+, необходимые для осуществления литического цикла фага. Идеальным средством для этой цели является β-глицерофосфат.
Образцы сыворотки нужно отбирать в конце обработки зерна в последних выработках, когда обсемененность сыворотки фагами максимальна, или, что еще лучше, из балансового танка перед сепарированием сыворотки или из танка для хранения сыворотки после сепарирования. Следует избегать хранения сыворотки или хранить фильтраты сыворотки, свободные от бактерий, при температуре до 5° С, в противном случае фаги или часть из них могут дезактивироваться.
Во ВНИИМС разработана процедура проведения фагового мониторинга на сыродельных предприятиях. Основу метода выявления фага составляет набор высокочувствительных к ЛФ штаммов лактококков (каждый чувствителен к более чем 50% коллекционных фагов); в совокупности штаммы, входящие в набор, чувствительны к 100% фагов, которые хранятся в коллекции ВНИИМС. Высокочувствительные штаммы высевают классическим методом на двухслойный агар для получения сплошного газона, в качестве среды используют среду для учета мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, вырабатываемую в коммерческих масштабах.