Методы количественного учета (часть 2)

15-04-2012, 17:25

Разведения исследуемого субстрата перед посевом на вышеприведенные среды для уничтожения вегетативных клеток прогревают (лучше при 75° С в течение 20 мин, так как при более высоких температурах погибает часть спор маслянокислых бактерий). Посевы непрогретых субстратов приведут к подавлению роста клостридий неспоровыми микроорганизмами, в частности молочнокислыми бактериями, которые прекрасно растут на этих средах и составляют большинство в молоке и сырах.
Для разработки элективных сред для выявления и количественного учета маслянокислых бактерий в молоке и сырах (спор и вегетативных клеток) была использована их способность ферментировать лактаты в присутствии ацетатов с образованием газов. В качестве источника азота был взят гидролизат казеина или мясопептонный бульон. В этой среде молочнокислые бактерии, составляющие большинство микрофлоры в сыре, и другие микроорганизмы, нуждающиеся для развития в анаэробных условиях в углеводах, расти не могут. Для подавления роста протеолитов, которые в небольших количествах могут быть в сырах, pH среды доводили молочной кислотой до 5,6-5,8. Показателями роста маслянокислых бактерий в этой среде (ЛACCA) являются газообразование, изменение окраски индикатора, в качестве которого взят нейтральрот, с красного до соломенно-желтого цвета. Среда была модифицирована и схема ее приготовления сейчас включает: ферментативное осаждение белков молока, промывку белкового сгустка водой для полного удаления лактозы, гидролиз полученного концентрата белков комплексом протеолитических энзимов и смешивание гидролизата с остальными компонентами.
ЛACCA может быть использована без прогрева засеваемого материала для определения общего количества спор и вегетативных клеток маслянокислых бактерий, и с прогревом - для подсчета только их спор. После застывания засеянной среды в пробирках ее заливают слоем водного агара высотой 1-2 см. Перед посевом среды для выявления и количественного учета маслянокислых бактерий кипятят для удаления из них растворенного воздуха, посевной материал вносят на дно пробирки.
Разработаны методы иммунологического обнаружения вегетативных клеток CL. tyrobutyricum, которые могут быть использованы при исследовании материалов, содержащих достаточно большое количество клеток этого вида.